제가 직접 수업프린트와 인터넷 검색으로 달아본 답인데요.
최대한 혼자서 해본게 이 정도입니다. 고칠부분이 정말 많을거 같아서 질문드려용ㅎ
배지를 처음부터 75L 만드는게 좀 아닌거 같기도 하구용...
4. 포도당(50g/L), Yeast extract(2g/L), MgSO₄·7H₂O (0.5g/L), KH₂PO₄ (2g/L), Vitamin C (0.5g/L)를 포함하는 생산배지(main medium)를 조제하여 100L 발효조(fermentor)에서 배양을 실시하고자 한다. 이때 접종량(seed 량)은 6%를 사용할 예정이다. 배지를 준비하고, 살균하는 방법을 설명하세요. 준비된 배지와 seed가 접종되었을 때 최종 부피는 75L가 되도록 한다
최종부피= 75L 이므로
접종량(seed 량) = 75L × 0.06 = 4.5L
배지의 부피 = 75 - 4.5 = 70.5L
- 생산배지 제조에 필요한 영양소량 계산
포도당 : 50g/L × 70.5L = 3525g
yeast extract : 2g/L × 70.5L = 141g
MgSO₄·7H₂O : 0.5g/L × 70.5L = 35.25g
KH₂PO₄ : 2g/L × 70.5L = 141g
Vitamin C: 0.5g/L × 70.5L = 35.25g
-배지준비
① 80L 용기와 30L 용기를 준비한다.
② 60L 용기에는 증류수를 40L를 붓는다.
③ 20L 용기에는 증류수 15L를 붓는다.
④ 포도당 3525g, MgSO₄·7H₂O 35.25g 을 ②의 용기에 달아 넣고 교반시켜 내용물을 다 녹인 후 바로 멸균시킨다.
⑤ yeast extract 141g, KH₂PO₄ 141g, Vitamin C 35.25g을 ③의 용기에 달아 넣고 교반시켜 내용물을 다 녹인 후 바로 멸균시킨다.
⑥ 두 용기의 내용물을 100L fermentor에 넣고 증류수를 가하여 전체량이 70.5L가 되도록 한다.
⑦ seed 4.5L를 fermentor에 넣어준다.
-주의사항
① PO₄³⁻ 는 Mg²⁺ 와 결합하여 물에 거의 용해되지 않는 침전물을 형성하므로 인산염과 마그네슘염은 별도로 멸균하여야 한다.
② 배지나 배지를 준비하는 용기는 대부분 미생물에 오염되어 있기 때문에 배지 조제 시 일단 물이 들어가면 그때부터 오염되어 있던 미생물이 갑자기 자라기 시작한 다. 따라서 증류수를 넣은 즉시 빨리 멸균을 해서 미생물들을 죽여야 한다.
③ 배지의 영양소중 열에 특별히 민감한 것은 없으므로 가장 널리 사용되는 autoclave를 이용하여 고압증기멸균을 한다.
